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反相色谱柱的工作原理

更新时间:2023-03-25      点击次数:2732
  反相色谱柱的介绍:
 
  根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的情况,称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用广泛,现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。
 
  反相色谱柱的原理:
 
  反相色谱是指利用非极性的反相介质为固定相,极性有机溶剂的水溶液为流动相,根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性,一般疏水性越大,分配系数越大。当固定相一定时,可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。由于反相介质表面为强烈疏水性,并且流动相为低极性的有机溶剂,生物活性大分子在反相色谱分离过程中容易变性失活,以回收生物活性蛋白质为目的时,应注意选用适宜的反相介质。
 
  反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸性水溶液,添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作为流动相。
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