在分离度方程式中有三个变量:柱效(N)、选择性(α)及保留因子(K)。我们可以看出,选择性(α)是调整和提高分离度有效的参数。
同时,色谱柱固定相是调整HPLC选择性(见表B)中四个有效的参数之一。当然,对于离子化分析物,流动相pH是有效的调节参数。此外,与色谱柱固定相同样重要的还有流动相中有机溶剂(乙腈 vs 甲醇)的选择、及有机溶剂含量/梯度斜率等等。
在开发一个色谱分析方法时,可以有多种方式来实现特定的分离和保留需求。一种是采取系统筛选多个固定相的方式,针对不同的分析,HALO®有不同的固定相。用于小分子反相分离的HALO®固定相请见表C,固定相排序方式是根据pH 2.8和pH 7条件下与HALO® C18的选择性差异而定的。例如,如果您在寻找一支低pH条件下与HALO® C18不同选择性的色谱柱,您可以在表C中选择HALO® PFP,因为这种固定相最有可能与C18正交。当然,其他的 HALO®固定相例如Phenyl-Hexyl、ES-CN、Biphenyl、RP-Amide等等,因其与HALO® C18、HALO® C8、HALO® AQ-C18保留机理之差异,也可以作为进行系统筛选的色谱柱之一或者一部分(图L)。另一种方法是通过对类似固定相的反复试验来达到。以HALO® C18 和 HALO® AQ-C18为例,由表C可知,这两个固定相之间不具备正交性,但HALO® AQ-C18的极性特点可能恰好是分析极性化合物所需要的。