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如何减少柱外体积

发表时间:2022-09-09      点击次数:357
如何使柱外体积达到最小?

第一,进样体积。要确保把进样体积控制在最小。


第二,样品溶剂。尽量保持样品的溶剂强度等于或小于初始流动相。如果必须使用*的有机溶剂作为样品溶剂,那么要尽可能减少进样量。


第三,柱前管路。需要确保您使用的是最小内径的管路。请注意,在样品流路中使用几种不同内径的管路可能会导致额外的扩散。对于梯度分离,通常可以忽略柱前管路对柱外体积的影响,但是,这个体积会对梯度延迟体积有影响。


第四,热交换器体积。有些仪器有不同体积的热交换器可供选择。当使用高柱温时,这有助于使流动相与色谱柱之间的温度相匹配。您需要使用与流速一致的最小体积的热交换器,特别是对于2.1mm内径色谱柱。


第五,柱后管路。需要确保您使用的是最小内径的管路。请注意,在样品流路中使用几种不同内径的管路可能会导致额外的扩散。对于20-50mm 2.1mm内径的色谱柱,75或100μm内径的管路可能会提供更好的结果,但是这会产生更高背压。


第六,流通池体积。对于2.1mm和3mm内径的色谱柱,通常使用1-5μl的流通池。更大的流通池通常用于4.6mm内径更长的色谱柱。

常规HPLC仪器的优化
      如果您没有UHPLC仪器,不用担心。您可以通过以下几个方面来优化您的系统以获得更高的性能。

     
      当在常规的HPLC仪器上使用高效的SPP色谱柱(如HALO)时,我们建议您按照以下几个步骤进行系统优化。先从简单、便宜
的优化开始,然后根据需要再进行更复杂和更昂贵的优化。一旦您取得了可以接受的结果,您可以选择放弃后续的优化。


第一,减少检测器的响应时间,提高数据采集频率。将检测器响应时间设置为小于0.1秒,并且数据采集频率大于20Hz。


第二,将进样体积减少到最小,并确保能达到可接受的峰值响应。

   
     第三,确保样品溶剂强度比流动相弱。如果这不能满足,那么需要对您的进样体积有所限制。如果是梯度分离,那么您能够注入比等度分离更多的样品。然而,保持样品溶剂强度小于初始流动相的强度仍然是重要的。
  

第四,使用体积更小,长度更短的管路。


第五,使用更小的流通池。

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